a.
Persiapan
1)
sediaan yang akan dicat
untuk specimen sputum dibuat sediaan yang berukuran 2
X 3 cm, sedangkan specimen dari reitz serum dibuat sediaan dengan ukuran 1 X
1,5 cm, yang langsung diambil dari penderita.ketentuan lainnya sama dengan sediaan secara umum.
2)
larutan karbol fuchsin :
a)
Basic fuchsin 0,3
gr
b)
alcohol 95% 10
ml
c)
Air suling 85
ml
d)
fenol 5
ml
Basic fuchsin
digerus dalam mortar sampai hancur,kemudian dilarutkan dalam
alcohol,ditambahkan air suling dan fenol,kocok dan saring kedalam botol yang
berwarna.
3)
Hcl-alcohol 3% atau asam sulfat 20-25%
a)
Hcl pekat 3
ml
b)
air suling 97
ml
4)
larutan air methylen blue :
a)
methylen blue 0,1
gr
b)
air suling 100
ml
methylen blue
digerus dalam mortar sampai
hancur,tambahkan sedikit air suling sambil digerus hingga methylene blue
larut betul.
cukupkan
volume menjadi 100 ml dan saring ke dalam botol yang berwarna
b.
cara pengecatan dan pembacaan hasil
1)sediaan dicat dengan karbol fuchsin sampai
menutupi seluruh permukaan kaca objek
2)dengan api kecil kaca objek dipanasi dari bawah
samapi zat warna menguap(tidak boleh mendidih),hal ini dilakukan 3 kali dalam
waktu 5 menit
3)zat warna dibuang dan sediaan dicuci dengan
HCL-alkohol 3% (untuk M.leprae dipakai HCL-alkohol 1%) sampai semua zat warna
keluar dari sediaan
4)sediaan dicuci air kemudian dicat dengan air methylene
blue selama 20 detik.
5)sediaan dicuci air,keringkan dan diperiksa
minimal 100 LP dan hasil dilaporkan
a)
untuk BTA M.tuberculosis
Negatif (-):tidak
ditemukan atau hanya 1-3 BTA dalam 100 LP
+ :ditemukan
antara 4-9 BTA dalam 100 LP
++ :ditemukan
10-99 BTA dalam 100 LP
+++ :ditemukan
rata-rata lebih dari 1 BTA tiap LP
++++ :jumlah
bakteri lebih dari 300 dalam 100 LP
b)
Untuk BTA M.leprae
negative(-) :tidak
ditemukan BTA dalam 100 LP
+ :ditemukan
antara 1-10 BTA dalam 100 LP
++ :ditemukan
1-10 BTA dalam 100 LP
+++ :ditemukan
1-10 BTA pada setiap LP
++++ :ditemukan
10-99 BTA pada setiap LP
+++++:ditemukan
100-1000 BTA pada setiap LP
++++++:ditemukan
lebih dari 1000 BTA pada setiap LP
Catatan : 1
glubus kecil :40-60 BTA
1
glubus besar : 200-300 BTA
1
clump :lebih
dari 500 BTA
Disamping pengecatan Ziehl
Neelsen sering digunakan pula pengecatan kinyoun untuk basil tahan asam yang
prosedurnya hampir sama,hanya pengecatan kinyounn tidak perlu lagi dipanasi
dengan kadar basis fuchsin tinggi(0,5-1%) dan kadar fenol 8% bukan 5 % seperti
pada pengecatan Ziehl Neelsen.